El Ferrocarril de Baltimore y Ohio (marcas informativas B&O, BO) fue el primer ferrocarril de transporte común y el ferrocarril más antiguo de los Estados Unidos, con su primera sección inaugurada en 1830. Comerciantes de la ciudad de Baltimore, que se había beneficiado hasta cierto punto de la construcción de la Carretera Nacional a principios de siglo, quería seguir compitiendo por el comercio con los colonos transapalaches con la autopista de peaje Albany-Schenectady construida en 1797, y el Canal Erie recién construido, inaugurado en 1825, (ambos sirvieron a Nueva York City), otro canal propuesto por Pensilvania (que habría conectado Filadelfia y Pittsburgh), el canal de Chesapeake y Ohio (C&O, que conectaba con la capital de la nación, Washington, D.C., aunque nunca llegó a Ohio), y el canal del río James , que dirigió el tráfico hacia Richmond y Norfolk, Virginia. Al principio, el B&O estaba ubicado completamente en el estado de Maryland, su línea original se extendía desde el puerto de Baltimore al oeste hasta Sandy Hook (inaugurado en 1834). Allí se conectó con Harper's Ferry (en barco, luego por el puente Wager) a través del Potomac hacia Virginia, y también con el río navegable Shenandoah.

Debido a la competencia con el canal C&O por el comercio con los yacimientos de carbón en el oeste de Maryland, el ferrocarril no podía usar el derecho de paso de C&O al oeste de Harpers Ferry. Por lo tanto, para continuar hacia el oeste a través de las Montañas Apalaches, B&O eligió construir el B & O Railroad Potomac River Crossing (1837) en Harpers Ferry, Virginia (desde 1863, West Virginia). La línea continuó a través de Virginia hasta un punto justo al oeste del cruce de Patterson Creek y North Branch Potomac River, donde volvió a cruzar a Maryland para llegar a Cumberland (1842), conectando con National Road, la ruta principal hacia el oeste. Llegó al río Ohio en Moundsville, Virginia (1852), Wheeling (1853), donde construyó una terminal, y unos años más tarde (1857) también a Parkersburg, Virginia, debajo de rápidos que dificultaban la navegación durante partes del año. Resultó crucial para el éxito de la Unión durante la Guerra Civil Estadounidense, aunque el conflicto también causó daños considerables y costos de reparación. Después del final de la guerra, B&O consolidó varias líneas alimentadoras en Virginia y Virginia Occidental, y se expandió hacia el oeste hasta Ohio (incluido un cruce en Portsmouth), Indiana e Illinois. La publicidad de B&O luego llevó el lema: "Uniendo 13 grandes estados con la nación".

Después de varias fusiones, B&O pasó a formar parte de la red CSX Transportation (CSX). El B&O también incluye el Ferrocarril Leiper, el primer ferrocarril tirado por caballos permanente en los EE. UU. A fines de 1970, el B&O operaba 5552 millas de carretera y 10 449 millas de vía, sin incluir Staten Island Rapid Transit (SIRT) o Reading y sus subsidiarias. Incluye el puente ferroviario operativo más antiguo de los Estados Unidos.

Cuando CSX estableció el B&O Railroad Museum como una entidad separada de la corporación, donó algunas de las antiguas B&O Mount Clare Shops en Baltimore, incluida la rotonda de Mt. Clare, al museo, mientras vendía el resto de la propiedad. El B&O Warehouse en el cruce ferroviario de Camden Yards en Baltimore ahora domina la vista sobre el muro del jardín derecho en la casa actual de los Orioles de Baltimore, Oriole Park en Camden Yards.

Parte de la inmortalidad de B&O Railroad proviene de ser uno de los cuatro ferrocarriles destacados en la versión original del juego de mesa Monopoly; es el único ferrocarril en el tablero que no sirvió directamente a Atlantic City, Nueva Jersey, la ciudad que da nombre a los lugares y nombres de la edición original del Monopoly.