O assentamento de Jamestown na Colônia da Virgínia foi o primeiro assentamento inglês permanente nas Américas. Ele estava localizado na margem nordeste do rio James (Powhatan) cerca de 2,5 mi (4 km) a sudoeste do centro da moderna Williamsburg. Foi estabelecido pela Virginia Company of London como "James Fort" em 4 de maio de 1607 O.S. (14 de maio de 1607 N.S.), e foi considerado permanente após um breve abandono em 1610. Seguiu-se várias tentativas fracassadas, incluindo a Colônia Perdida de Roanoke, estabelecida em 1585 na Ilha de Roanoke, parte posterior da Carolina do Norte. Jamestown serviu como capital colonial de 1616 a 1699.

Apesar do envio de mais colonos e suprimentos, incluindo a chegada em 1608 de oito colonos poloneses e alemães e as duas primeiras mulheres europeias, mais de 80% dos colonos morreram em 1609-10, principalmente de fome e doenças. Em meados de 1610, os sobreviventes abandonaram Jamestown, embora tenham retornado depois de encontrar um comboio de reabastecimento no rio James.

Em agosto de 1619, os primeiros escravos registrados da África para a América do Norte britânica chegaram ao que hoje é Old Point Comfort, perto da colônia de Jamestown, em um navio corsário britânico com bandeira holandesa. Os cerca de 20 africanos da atual Angola foram retirados pela tripulação britânica do navio negreiro português São João Bautista. Eles provavelmente trabalhavam nos campos de tabaco como escravos sob um sistema de servidão por contrato baseado na raça. Um deles incluía Angela, que foi comprada por William Peirce. A concepção moderna de escravidão nos Estados Unidos coloniais foi formalizada em 1640 (a audiência de John Punch) e foi totalmente enraizada na Virgínia em 1660. O segundo assentamento da London Company nas Bermudas afirma ser o local da cidade mais antiga do Novo Mundo Inglês , como St. George's, Bermudas, foi oficialmente estabelecido em 1612 como New London, enquanto James Fort na Virgínia não foi convertido em James Towne até 1619, e ainda não sobreviveu até os dias atuais. Rebelião, embora tenha sido rapidamente reconstruída. Em 1699, a capital colonial foi transferida para o que hoje é Williamsburg, Virgínia; Jamestown deixou de existir como um assentamento e permanece hoje apenas como um sítio arqueológico, Jamestown Reddiscovery.

Hoje, Jamestown é um dos três locais que compõem o Triângulo Histórico da Virgínia Colonial, junto com Williamsburg e Yorktown, com dois patrimônios principais. Historic Jamestowne é o sítio arqueológico na Ilha de Jamestown e é um esforço cooperativo do Jamestown National Historic Site (parte do Colonial National Historical Park) e da Preservation Virginia. Jamestown Settlement, um local interpretativo de história viva, é operado pela Jamestown Yorktown Foundation, uma agência estadual da Commonwealth of Virginia.