巴尔的摩和俄亥俄铁路（报告标记 B&O，BO）是美国第一条公共承运铁路，也是美国最古老的铁路，其第一段于 1830 年开通。巴尔的摩市的商人在一定程度上受益于在本世纪初修建国道，希望继续与跨阿巴拉契亚定居者竞争贸易与 1797 年建成的奥尔巴尼-斯克内克塔迪收费公路和 1825 年开通的新建伊利运河（两者都服务于纽约） City），宾夕法尼亚州提议的另一条运河（将连接费城和匹兹堡），切萨皮克和俄亥俄运河（C＆O，连接国家首都华盛顿特区，尽管它从未到达俄亥俄州）和詹姆斯河运河，它指挥了往里士满和诺福克，弗吉尼亚的交通。起初，B&O 完全位于马里兰州，其原始线路从巴尔的摩港向西延伸至桑迪胡克（1834 年开业）。在那里，它与穿过波托马克进入弗吉尼亚的哈珀渡口（乘船，然后通过瓦格桥）相连，并与可通航的雪兰多河相连。

由于与马里兰州西部煤田贸易的 C&O 运河竞争，铁路无法使用哈珀斯费里以西的 C&O 通行权。因此，为了继续向西穿过阿巴拉契亚山脉，B&O 选择在弗吉尼亚州哈珀斯费里（自 1863 年起，西弗吉尼亚州）建造 B&O 铁路波托马克河渡口（1837 年）。这条线继续穿过弗吉尼亚州，到达帕特森溪和北支波托马克河交汇处以西的一点，在那里它回到马里兰州，到达坎伯兰（1842 年），与向西的主要路线国道相连。它到达了弗吉尼亚州芒兹维尔的俄亥俄河（1852 年），惠灵（1853 年），在那里它建立了一个终点站，几年后（1857 年）还到达了弗吉尼亚州的帕克斯堡，在一年中的部分时间里，在急流下方使航行变得困难。事实证明，这对美国内战期间联盟的成功至关重要，尽管冲突也造成了相当大的破坏和维修费用。战争结束后，B&O 合并了弗吉尼亚州和西弗吉尼亚州的几条支线，并向西扩展到俄亥俄州（包括朴茨茅斯的一个枢纽）、印第安纳州和伊利诺伊州。 B&O 的广告后来带有这样的座右铭：“将 13 个伟大的国家与国家联系起来”。

经过几次合并，B&O 成为 CSX 运输 (CSX) 网络的一部分。 B&O 还包括 Leiper Railroad，这是美国第一条永久性马拉铁路。 1970 年底，B&O 运营了 5,552 英里的公路和 10,449 英里的轨道，不包括史泰登岛捷运 (SIRT) 或雷丁及其子公司。它包括美国最古老的运营铁路桥。

当 CSX 将 B&O 铁路博物馆作为独立于公司的实体建立时，它向博物馆捐赠了巴尔的摩的一些前 B&O 克莱尔山商店，包括 Mt. Clare 圆屋，同时出售了其余财产。位于巴尔的摩 Camden Yards 铁路枢纽的 B&O Warehouse 现在占据了巴尔的摩金莺队目前的家——Camden Yards 的金莺公园右侧外墙的视野。

B&O Railroad 的部分不朽之处在于它是原版棋盘游戏《大富翁》中的四个特色铁路之一；它是船上唯一一条不直接服务于新泽西州大西洋城的铁路，该城市的地名和名称都是以大富翁的原始版本命名的。