第二次石勒苏益格战争（丹麦语：Krigen i 1864；德语：Deutsch-Dänischer Krieg）有时也称为达诺-普鲁士战争或普鲁士-丹麦战争，是 19 世纪石勒苏益格-荷尔斯泰因问题的第二次军事冲突。战争于 1864 年 2 月 1 日开始，当时普鲁士和奥地利军队越过边界进入石勒苏益格。丹麦与普鲁士王国和奥地利帝国作战。与第一次石勒苏益格战争（1848-1852 年）一样，由于丹麦国王在没有德意志联邦可接受的继承人的情况下去世时，由于与他们有关的继承纠纷，这场战争是为了控制石勒苏益格、荷尔斯泰因和劳恩堡公国而进行的。战争是在 1863 年 11 月宪法通过后开始的，该宪法违反了《伦敦议定书》，将石勒苏益格公国并入丹麦王国。

战争于 1864 年 10 月 30 日结束，《维也纳条约》和丹麦将石勒苏益格公国（埃罗岛除外，仍为丹麦）、荷尔斯泰因和萨克森-劳恩堡割让给普鲁士和奥地利。